Perbedaan Utama - Halaman SDS vs Halaman Asli
SDS dan halaman asli adalah dua jenis teknik elektroforesis gel poliakrilamida yang digunakan dalam Biologi Molekuler. Perbedaan utama antara SDS Page dan Native Page adalah jenis gel poliakrilamida yang digunakan. Dalam SDS Page, gel denaturasi digunakan oleh karena itu, molekul dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, di Native Page, gel non-denaturasi digunakan. Oleh karena itu, molekul dipisahkan berdasarkan ukuran, muatan, dan bentuknya.
Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Halaman) menggunakan gel yang dibuat dengan mempolimerisasi monomer akrilamida dengan metilen bisakrilamida. Poliakrilamida lebih keras dan lebih stabil terhadap panas dibandingkan agarosa. Gel poliakrilamida memiliki ukuran pori yang lebih kecil yang memungkinkan pemisahan protein secara efisien. Ada dua jenis utama pengaturan Halaman yaitu SDS Page dan Native Page. SDS Page atau Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel electrophoresis memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel denaturasi digunakan di SDS Page. Native Page menggunakan gel non-denaturasi dan memisahkan protein berdasarkan ukuran, muatan, dan bentuknya (konformasi 3D).
ISI
1. Gambaran Umum dan Perbedaan Utama
2. Apa Itu Halaman SDS
3. Apa Itu Halaman Asli
4. Persamaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli
5. Perbandingan Berdampingan - Halaman SDS vs Halaman Asli dalam Bentuk Tabel
6. Ringkasan
Apa itu Halaman SDS?
SDS Page adalah teknik elektroforesis yang paling umum digunakan untuk memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel dibuat dengan menambahkan SDS (Sodium dodecyl sulfate), yang merupakan deterjen. SDS gigi tiruan protein menjadi monomer. SDS adalah deterjen anionik. Oleh karena itu, ia menambahkan muatan negatif bersih ke protein dalam kisaran pH yang luas. Ketika muatan negatif bersih diberikan pada molekul protein, karena variasi muatan, struktur kompleks dipecah. Karena muatan negatif, protein menarik ke arah ujung positif. Jadi molekul dengan berat molekul lebih rendah bergerak lebih cepat pada matriks gel dan dapat diamati di dekat anoda, sedangkan protein dengan berat molekul lebih tinggi diamati lebih dekat ke sumur.
Gambar 01: Halaman SDS
Pengikatan SDS ke rantai polipeptida sebanding dengan massa molekul relatifnya. Oleh karena itu, massa molekul juga dapat ditentukan melalui SDS Page. Pewarnaan gel Halaman SDS dilakukan dengan pewarnaan bromophenol biru. Aplikasi rentang halaman SDS ke tingkat yang lebih luas di mana dapat digunakan untuk memperkirakan massa molekul relatif dan untuk menentukan kelimpahan relatif protein dalam campuran protein. SDS Page juga dapat digunakan untuk menentukan distribusi protein dalam suatu campuran protein. Halaman SDS juga diterapkan untuk memurnikan dan menilai protein. Ini digunakan sebagai prosedur awal untuk western blotting dan hibridisasi, yang selanjutnya digunakan untuk pemetaan dan identifikasi protein.
Apa itu Native Page?
Elektroforesis gel Poliakrilamida asli (Halaman Asli) menggunakan gel non-denaturasi. Oleh karena itu, SDS atau agen denaturasi lainnya tidak ditambahkan ke matriks gel. Di Native Page, pemisahan protein didasarkan pada muatan dan ukuran protein. Oleh karena itu, mobilitas protein bergantung pada muatan dan ukuran protein.
Muatan protein tergantung pada rantai samping asam amino. Jika rantai samping bermuatan negatif, protein akan menerima muatan negatif secara keseluruhan dan sebaliknya. Protein mempertahankan konformasi 3D karena lipatan yang terjadi. Hasil pelipatan dari beberapa jenis ikatan pada protein seperti ikatan disulfida, interaksi hidrofobik dan ikatan hidrogen. Oleh karena itu, jika Page asli dibawa pada pH netral, protein akan dipisahkan sesuai dengan bentuk molekul protein tersebut. Oleh karena itu, Native Page dapat digunakan sebagai teknik sensitif untuk mendeteksi perubahan muatan atau konformasi protein.
Keuntungan utama dari Halaman asli adalah bahwa protein yang digunakan untuk analisis Halaman dapat dipulihkan dalam keadaan aslinya setelah analisis Halaman, karena protein tidak terganggu selama proses tersebut. Native Page adalah teknik throughput yang relatif tinggi, dan stabilitas protein ditingkatkan.
Gambar 02: Halaman Asli
Setelah selesai menjalankan gel, gel Halaman Asli dapat dilihat dengan pewarnaan dengan bromofenol biru atau reagen pewarnaan lain yang sesuai. Aplikasi Native Page mencakup pemisahan protein asam termasuk glikoprotein seperti eritropoietin rekombinan manusia atau identifikasi protein yang ada dalam Bovine Serum Albumin (BSA).
Apa Persamaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?
- Sistem SDS Page dan Native Page menggunakan gel poliakrilamida sebagai matriks gel.
- Keduanya digunakan untuk pemisahan dan identifikasi protein.
- Keduanya menggunakan mobilitas elektroforetik untuk memisahkan senyawa.
- Keduanya dapat dilakukan secara vertikal atau horizontal (sebagian besar dilakukan sebagai pengaturan Halaman vertikal karena run length lebih).
- Peralatan elektroforesis termasuk tangki gel, sisir, catu daya diperlukan untuk pengoperasian kedua teknik.
- Visualisasi gel dapat dilakukan dengan metode pewarnaan pada kedua teknik tersebut.
Apa Perbedaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
Halaman SDS vs Halaman Asli |
|
| SDS Page atau Sodium-dodecyl sulfate Page memisahkan protein berdasarkan berat molekulnya, dan menggunakan gel denaturasi. | Native Page menggunakan gel non-denaturasi dan memisahkan protein berdasarkan ukuran, muatan, dan bentuknya (konformasi 3D). |
| Jenis Gel | |
| Gel denaturasi digunakan di halaman SDS. | Gel non-denaturasi digunakan di halaman asli. |
| Kehadiran SDS | |
| SDS hadir sebagai deterjen untuk memberikan muatan negatif pada sampel di halaman SDS. | SDS tidak ada di halaman asli. |
| Dasar Pemisahan | |
| Pemisahan protein tergantung pada berat molekul protein pada halaman SDS. | Pemisahan tergantung pada ukuran dan bentuk molekul protein di halaman asli. |
| Stabilitas Protein | |
| Stabilitas protein rendah di halaman SDS. | Stabilitas protein tinggi di halaman asli. |
| Pemulihan Protein Asli | |
| Tidak mungkin karena didenaturasi di halaman SDS. | Mungkin di halaman asli. |
Ringkasan - Halaman SDS vs Halaman Asli
SDS Page dan Native Page adalah dua jenis teknik elektroforesis gel Poliakrilamida yang digunakan untuk memisahkan protein. SDS Page dirawat dengan deterjen yang disebut SDS. SDS memberikan muatan negatif keseluruhan ke protein, yang kemudian menghasilkan denaturasi protein. Oleh karena itu, protein dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, teknik Native Page tidak menggunakan agen denaturasi apa pun. Dengan demikian, protein dipisahkan berdasarkan ukuran atau bentuknya. Ini adalah perbedaan antara halaman SDS dan halaman asli.
