Perbedaan Kunci - Marker yang Dapat Dipilih vs Gen Reporter
Teknik rekayasa genetika digunakan untuk mentransfer gen penting dari organisme ke organisme lain. Penyisipan gen asing ke dalam genom organisme lain dan membuatnya diekspresikan di dalam sel inang adalah langkah tersulit dalam transfer gen. Untuk mendeteksi keberhasilan proses transformasi, penanda yang dapat dipilih dan gen pelapor digunakan dalam molekul rekombinan. Penanda yang dapat dipilih adalah urutan DNA atau gen yang mengekspresikan dan memilih sel yang diubah dari sel yang tidak berubah. Gen reporter adalah gen lain yang digunakan untuk membedakan sel yang ditransformasikan dan untuk mengukur atau mendeteksi bagaimana gen yang disisipkan berfungsi di dalam inang. Perbedaan utama antara penanda yang dapat dipilih dan gen pelapor adalah bahwa penanda yang dapat dipilih digunakan untuk menyaring sel-sel yang tidak berubah dan untuk memberi sinyal pada sel-sel yang ditransformasikan sementara gen pelapor digunakan untuk mengukur tingkat ekspresi gen di dalam inang.
DAFTAR ISI
1. Gambaran Umum dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Penanda yang Dapat Dipilih
3. Apa itu Gen Reporter
4. Perbandingan Berdampingan - Marker yang Dapat Dipilih vs Gen Reporter
5. Ringkasan
Apa itu Penanda yang Dapat Dipilih?
Dalam rekayasa genetika, gen yang diinginkan dimasukkan ke dalam vektor yang sesuai dan diubah menjadi organisme inang. Namun, transformasi hanya berhasil pada sel inang yang kompeten, dan ada kemungkinan sel inang menolak pengambilan DNA asing. Oleh karena itu, diferensiasi sel yang ditransformasikan dan sel yang tidak berubah penting untuk dilanjutkan dengan eksperimen lebih lanjut. Oleh karena itu, para peneliti menggabungkan gen penanda yang dapat dipilih ke vektor untuk memudahkan pemilihan sel yang diubah dari sel yang tidak berubah. Penanda yang dapat dipilih adalah urutan DNA, terutama gen yang berguna dalam identifikasi sel yang diubah. Gen penanda ini menunjukkan sifat yang sesuai dengan seleksi buatan sel yang ditransformasikan dari sel yang tidak berubah pada media.
Penanda terseleksi yang paling umum digunakan dalam biologi molekuler adalah gen resisten antibiotik. Gen resistensi antibiotik dimasukkan ke dalam vektor dan ditransformasikan menjadi sel inang terutama menjadi bakteri inang. Antibiotik khusus itu dimasukkan ke dalam media pertumbuhan bakteri. Karena adanya penanda selektif, dalam kondisi selektif, hanya sel yang berisi penanda terpilih yang sesuai yang dapat bertahan. Sel yang tidak berubah tidak dapat tumbuh dalam media yang mengandung antibiotik. Oleh karena itu, karena penanda yang dapat dipilih yang resisten terhadap antibiotik, sel-sel yang berubah dengan mudah diidentifikasi.
Gen yang memberi sifat antimetabolit, herbisida digunakan sebagai penanda selektif dalam vektor kloning dalam rekayasa genetika tanaman. Namun, transformasi penanda selektif menjadi organisme hasil rekayasa genetika ini memiliki efek negatif terhadap lingkungan dan manusia. Pelepasan bakteri resisten antibiotik dapat meningkatkan resistivitas antibiotik dari patogen manusia. Ini dapat mencemari produk atau biomassa oleh antibiotik dan dapat kehilangan tekanan selektif sebagai akibat dari degradasi dan inaktivasi antibiotik.
Gambar 01: Vektor plasmid untuk transfer gen dengan penanda yang dapat dipilih
Apa itu Reporter Gene?
Gen pelapor adalah gen yang memungkinkan pendeteksian atau pengukuran ekspresi gen yang disisipkan. Gen reporter ini dapat dilampirkan ke urutan regulasi gen yang diinginkan untuk memberi sinyal lokasi atau level ekspresi. Oleh karena itu, selama ekspresi gen di bawah promotor yang sama, mereka ditranskripsi menjadi urutan mRNA tunggal dan kemudian diterjemahkan menjadi protein yang dapat menunjukkan tingkat ekspresi gen.
Gen pelapor terdiri dari berbagai jenis, dan mengandung karakteristik yang dapat diidentifikasi secara visual yang biasanya terlibat dalam protein fluoresen dan luminescent. Gen yang mengkode protein dan enzim fluoresen, mengubah substrat yang tidak terlihat menjadi produk bercahaya atau berwarna dengan memberi sinyal pada ekspresi gen yang berhasil dan memberikan kesempatan untuk kuantifikasi ekspresi gen.
Gambar 02: Ekspresi Gen Reporter
Apa perbedaan antara Selectable Marker dan Reporter Gene?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
Gen Penanda vs Reporter yang Dapat Dipilih |
|
| Penanda yang dapat dipilih adalah sejenis urutan DNA yang membantu membedakan sel yang diubah dengan sel yang tidak berubah. | Gen reporter adalah gen yang membantu mengukur ekspresi gen yang diinginkan yang dimasukkan ke dalam sel inang. |
| Sifat Unit yang Diproduksi | |
| Gen dikodekan dengan karakteristik yang membantu dalam seleksi buatan pada media tanam. | Gen dikodekan dengan karakteristik yang dapat diidentifikasi secara visual. |
| Pemakaian | |
| Gen resistensi antibiotik, gen antimetabolit, gen resistensi herbisida, dll. Adalah contoh penanda yang dapat dipilih. | Contoh kode gen untuk protein fluoresen hijau, β-glukuronidase, Kloramfenikol asetiltransferase, protein fluoresen merah, dll. |
Ringkasan - Marker yang Dapat Dipilih vs Gen Reporter
Penanda yang dapat dipilih memungkinkan sel yang diubah tumbuh di media selektif yang diberi antibiotik atau herbisida tertentu. Mereka digunakan untuk seleksi awal sel yang diubah. Gen reporter digunakan untuk mengukur tingkat ekspresi dari gen yang diinginkan yang disisipkan. Mereka juga memungkinkan diferensiasi sel yang berubah dan tidak berubah. Inilah perbedaan antara penanda yang dapat dipilih dan gen pelapor. Baik penanda yang dapat dipilih maupun gen pelapor dianggap sebagai penanda penting dalam rekayasa genetika.
