Perbedaan Kunci - T4 vs T7 DNA Ligase
DNA ligase adalah enzim penting yang digunakan dalam teknik biologi molekuler. Ini berfungsi sebagai perekat molekuler untuk bergabung dengan nukleotida dengan membentuk ikatan fosfodiester antara nukleotida. Ikatan fosfodiester terbentuk antara ujung 3 'hidroksil dari gugus gula dan gugus fosfat ujung 5'. DNA ligase sangat penting dalam proses replikasi untuk bergabung dengan fragmen Okazaki dari untai yang tertinggal dan selama mekanisme perbaikan DNA dan eksperimen kloning in vitro untuk menggabungkan gen yang diinginkan ke genom vektor. Ada dua ligase DNA utama yang saat ini digunakan oleh ahli biologi molekuler: ligase DNA T4 dan T7. T4 DNA ligase adalah salah satu enzim pertama yang diisolasi dari bakteriofag T4. T7 DNA ligase, yang merupakan protein yang lebih kecil, adalah enzim yang diisolasi dari bakteriofag T7. Inilah perbedaan utama antara ligase DNA T4 dan T7.
ISI
1. Gambaran Umum dan Perbedaan Utama
2. Apa Aksi DNA Ligase
3. Apa itu T4 DNA Ligase
4. Apa itu T7 DNA Ligase
4. Persamaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase
5. Perbandingan Berdampingan - T4 vs T7 DNA Ligase dalam Bentuk Tabel
6. Ringkasan
Apa Aksi DNA Ligase?
Ligasi DNA terjadi dalam reaksi tiga langkah. Langkah pertama adalah serangan nukleofilik pada alfa-fosfor ATP yang menghasilkan perantara enzim-adenilat kovalen di mana AMP dihubungkan ke nitrogen rantai samping terminal lisin. Pada langkah kedua, serangan nukleofilik terjadi pada fosfor dari enzim-adenilat oleh substrat DNA berujung 5′-fosfat, melepaskan lisin dan membentuk DNA-adenilat. Pada langkah terakhir, DNA-adenylate diserang oleh 3'-OH untai DNA lain, melepaskan AMP dan bergabung dengan polinukleotida.
Apa itu T4 DNA Ligase?
T4 Ligase adalah ligase pertama yang diisolasi dan diidentifikasi oleh Meselson, Weigle, dan Kellenberger dan merupakan ligase komersial pertama yang diproduksi. T4 DNA ligase adalah enzim yang bergantung pada ATP yang mengkatalisis pembentukan ikatan fosfodiester. Ini adalah rantai polipeptida tunggal dengan 487 residu asam amino dan memiliki berat molekul sekitar 77 kDa. PH optimum untuk aktivitasnya berada pada kisaran 7,5 - 8.
Gambar 01: T4 DNA Ligase
T4 DNA Ligase, seperti namanya, hadir dalam bakteriofag T4 dan diisolasi ketika fag menghasilkan enzim setelah terinfeksi E. coli. Enzim mengikat dupleks DNA beruntai ganda dengan ujung tumpul dan fragmen yang akan diikat harus berdekatan satu sama lain.
Apa itu T7 DNA Ligase?
Ligase T7 merupakan protein 41 kDa yang diproduksi oleh T7 Bacteriophage dan diisolasi dengan cara menginfeksi sel E. coli. Fungsi utama T7 ligase adalah untuk mengikat dupleks DNA melalui hubungan fosfodiester dan bergabung dengan fragmen DNA terdekat selama percobaan kloning. PH optimum untuk DNA ligase T7 terletak pada kisaran 7,0 - 7,2. T7 ligase bergantung pada ATP. Ligase DNA T7 juga mampu melakukan anil DNA dan hibrida RNA, sehingga menimbulkan konformasi abnormal selama transkripsi; Namun, fenomena ini masih dalam penelitian oleh studi in vitro.
Apa Persamaan Antara DNA Ligase T4 dan T7?
- DNA Ligase T4 dan T7 berpartisipasi dalam reaksi ligasi dengan menganil dupleks DNA melalui pembentukan ikatan fosfodiester antara ujung 3 'OH dan ujung 5' fosfat dari fragmen DNA.
- Kedua enzim mengikat dupleks DNA berujung tumpul yang berdekatan satu sama lain.
- Kedua enzim bergantung pada ATP.
- Enzim ini diisolasi dengan menginfeksi sel E. coli dengan bakteriofag tertentu.
-
Aplikasi kedua enzim tersebut meliputi:
- Kloning molekuler - untuk mengikat gen yang diinginkan ke vektor
- Perbaikan DNA - untuk memperbaiki relung beruntai ganda
- Replikasi DNA in vitro
- Reaksi berantai ligase
Apa Perbedaan Antara T4 dan T7 DNA Ligase?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
T4 vs T7 DNA Ligase |
|
| T4 DNA Ligase jenis DNA ligase diisolasi dari bakteriofag T4 dan terlibat dalam pengikatan fragmen DNA yang berdekatan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. | T7 DNA Ligase jenis DNA ligase diisolasi dari bakteriofag T7 dan terlibat dalam pengikatan fragmen DNA yang berdekatan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. |
| Ukuran Protein | |
| Ukuran ligase DNA T4 adalah 77 kDa - lebih besar dibandingkan dengan ligase DNA T7. | Ukuran DNA ligase T7 adalah 41 kDa. |
| PH optimal | |
| Rentang pH yang bekerja T4 DNA ligase adalah 7,5 - 8,0. | Rentang pH yang bekerja T7 DNA ligase adalah 7,0 - 7,2. |
Ringkasan - T4 vs T7 DNA Ligase
DNA ligase adalah kelas enzim penting yang terlibat dalam kloning molekuler untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang mengandung gen yang diinginkan. Reaksi ligasi adalah reaksi yang memanfaatkan energi dan ada studi penelitian baru yang sedang dilakukan untuk meningkatkan akurasi melalui modulasi ligase yang tersedia. Ligase DNA T4 dan T7 adalah dua jenis enzim DNA ligase penting yang digunakan dalam teknik biologi molekuler. DNA ligase T7 juga merupakan hasil penelitian yang didasarkan pada ligase primer yang diisolasi dari E. coli yang terinfeksi T4. T7 digambarkan lebih efisien dan akurat dalam menjalankan fungsinya karena ukurannya yang lebih kecil. Inilah perbedaan antara ligase T4 dan T7.
Unduh Versi PDF T4 vs T7 DNA Ligase
Anda dapat mengunduh versi PDF dari artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan offline sesuai catatan kutipan. Silahkan download versi PDF disini Perbedaan Antara T4 dan T7 Ligase.
