Perbedaan Utama - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
Enzim-linked immunoassay (ELISA), juga dikenal sebagai enzyme immunoassay, adalah tes serologis yang mendeteksi antibodi dalam darah. Ini digunakan sebagai alat diagnostik untuk mengetahui apakah pasien telah terpajan pada jenis virus tertentu atau agen penular lain (antigen) dan apakah tubuh telah memproduksi antibodi untuk melawan infeksi. ELISA juga dapat mengidentifikasi infeksi masa lalu dan saat ini. Oleh karena itu, ELISA sering digunakan sebagai tes prapenyaringan oleh dokter sebelum analisis penyakit yang mendalam. Tes ini bisa dilakukan di laboratorium dengan mengambil sampel darah dari pasien. Ada dua jenis tes ELISA: ELISA langsung dan ELISA tidak langsung. Perbedaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung adalah ELISA tidak langsung lebih sensitif dan memerlukan penambahan antibodi sekunder sedangkan ELISA langsung kurang sensitif dan hanya menggunakan antibodi primer.
DAFTAR ISI
1. Gambaran Umum dan Perbedaan Utama
2. Apa itu ELISA Langsung
3. Apa itu ELISA Tidak Langsung
4. Perbandingan Berdampingan - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
5. Ringkasan
Apa itu ELISA Langsung?
ELISA adalah tes diagnostik penyakit yang dilakukan untuk mengidentifikasi adanya antigen atau antibodi tertentu dalam darah. Ini dilakukan sebagai uji pelat. Ia menggunakan antibodi yang dihubungkan dengan enzim yang mudah diuji. Kehadiran antigen dalam sampel serum terikat dengan antibodi spesifik yang terkait dengan enzim. Pada langkah terakhir, substrat spesifik ditambahkan untuk bereaksi dengan enzim. Enzim mengubah substrat menjadi produk berwarna atau penghasil sinyal. Perubahan warna pada substrat kimiawi menunjukkan adanya antibodi tertentu dalam sampel serum. Tes ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer yang terkait dengan enzim. Setelah mengikat antigen, itu dengan cepat mengubah warna, menunjukkan adanya agen infeksi dalam darah. Namun,intensitas sinyal lebih lemah dalam ELISA langsung karena epitop terbatas pada pengikatan antigen. Oleh karena itu, ELISA langsung kurang sensitif dibandingkan dengan ELISA tidak langsung.
Gambar 01: Tes ELISA Langsung
Apa ELISA Tidak Langsung itu?
ELISA dapat dilakukan dengan menggunakan dua jenis antibodi yaitu; antibodi primer dan antibodi sekunder. Alat ELISA tidak langsung menggunakan kedua jenis antibodi untuk memperkuat sinyal agar deteksi lebih baik. Teknik ELISA tidak langsung dilakukan sebagai berikut.
- Pelat diinkubasi dengan antigen dan dicuci untuk memblokir pengikatan yang tidak spesifik.
- Kemudian antibodi primer ditambahkan dan dicuci.
- Antibodi sekunder terkait enzim ditambahkan dan dicuci.
- Substrat ditambahkan dan dibiarkan bereaksi dengan enzim.
- Sinyal terdeteksi, dan ada atau tidaknya antigen spesifik dalam sampel diidentifikasi.
Pada tes ELISA tidak langsung, beberapa antibodi sekunder dapat berikatan dengan satu antibodi primer. Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim yang mudah diuji. Oleh karena itu, satu pengikatan dapat menghasilkan sinyal yang kuat karena lebih dari satu interaksi. Karenanya, ELISA tidak langsung lebih sensitif daripada ELISA langsung. Namun, ELISA tidak langsung dapat membuat sinyal nonspesifik karena reaksi silang dari antibodi sekunder.
Gambar 02: Tes ELISA Tidak Langsung
Apa perbedaan ELISA Langsung dan Tidak Langsung?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
ELISA Langsung vs Tidak Langsung |
|
| ELISA langsung kurang sensitif dibandingkan dengan ELISA tidak langsung. | ELISA tidak langsung lebih sensitif. |
| Waktu yang Diambil | |
| Tes ELISA langsung adalah proses yang cepat. | ELISA tidak langsung memakan waktu. |
| Penggunaan Antibodi | |
| Hanya satu jenis antibodi (Antibodi primer) yang digunakan dalam ELISA langsung. | Antibodi primer dan sekunder digunakan untuk ELISA tidak langsung. |
| Hubungkan dengan Enzim | |
| Antibodi primer dihubungkan dengan enzim. | Antibodi sekunder dihubungkan dengan enzim. |
| Reaktivitas Silang Antibodi Kedua | |
| ELISA langsung menghilangkan reaktivitas silang dari antibodi kedua. | ELISA tidak langsung dipengaruhi oleh reaktivitas silang antibodi kedua. |
| Sinyal | |
| Sinyal lemah dibandingkan dengan ELISA tidak langsung. | Sinyal diperkuat dalam ELISA tidak langsung. Karenanya, mudah dideteksi. |
Ringkasan - ELISA Langsung vs Tidak Langsung
ELISA adalah teknik biokimia yang digunakan terutama dalam imunologi untuk mendeteksi keberadaan antibodi atau antigen dalam sampel darah pasien. Ini dapat dilakukan melalui dua proses yang dikenal sebagai ELISA langsung atau tidak langsung. Tes ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer untuk mendeteksi antigen sedangkan ELISA tidak langsung menggunakan antibodi primer dan sekunder. Dalam ELISA langsung, antibodi primer diberi label sedangkan pada ELISA tidak langsung antibodi sekunder diberi label. Inilah perbedaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.
