Perbedaan Kunci - Tripsinisasi Hangat vs Dingin
Tripsinisasi Hangat dan Dingin adalah dua metode yang digunakan dalam disagregasi enzimatik sel dalam kultur sel hewan. Perbedaan utama antara tripsinisasi hangat dan dingin, seperti namanya, bergantung pada suhu di mana tripsin ditambahkan untuk disagregasi seluler. Tripsinisasi hangat terjadi pada kondisi suhu yang lebih tinggi (36,5 - 37 0 C) sedangkan tripsinisasi dingin terjadi pada kondisi suhu rendah.
Selama proses kultur sel primer sel hewan, ada tiga metode utama yang digunakan dan terbukti berhasil. Ketiga metode tersebut meliputi disagregasi mekanis sel, disagregasi enzimatis sel, dan teknik eksplan primer. Disagregasi enzimatis sel mengarah ke isolasi sel dan dilakukan oleh tripsin enzim pendegradasi protein. Oleh karena itu, proses ini dikenal sebagai Tripsinisasi. Tripsinisasi dapat dilakukan dalam dua kondisi berbeda yaitu Tripsinisasi Hangat dan Tripsinisasi Dingin. Tripsinisasi hangat adalah metode pengobatan sel dengan tripsin dalam kondisi hangat pada suhu 36,5 - 37 0C. Tripsinisasi dingin adalah proses pengobatan tripsin yang berlangsung dalam kondisi yang lebih dingin, lebih disukai dalam es yang mempertahankan suhu yang sangat rendah.
ISI
1. Gambaran Umum dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Tripsinisasi Hangat
3. Apa itu Tripsinisasi Dingin
4. Persamaan Antara Tripsinisasi Hangat dan Dingin
5. Perbandingan Berdampingan - Tripsinisasi Hangat vs Dingin dalam Bentuk Tabel
6. Ringkasan
Apa itu Tripsinisasi Hangat?
Tripsinisasi dapat dilakukan untuk memisahkan komponen seluler guna mengisolasi sel untuk menghasilkan kultur sel primer. Tripsin adalah enzim degradasi protein, dan campuran enzim yang digunakan dalam tripsinisasi dapat berupa ekstrak kasar atau produk yang dimurnikan. Ekstrak kasar dikatakan lebih efisien dalam lisis protein dan disintegrasi sel karena mengandung enzim pengurai lainnya.
Tripsinisasi hangat adalah metode enzimatis yang paling umum digunakan untuk disagregasi sel yang terjadi di bawah kondisi suhu yang lebih tinggi. Sebelum perawatan dengan tripsinisasi, jaringan yang diinginkan dipotong menjadi potongan-potongan kecil. Ini memfasilitasi proses disagregasi yang mudah. Tisu yang telah dicincang tersebut kemudian dicuci dalam media khusus yang dikenal dengan media Dissection Basal Salt.
Setelah tahap pencucian selesai, sel-sel tersebut diubah menjadi labu yang berisi enzim aktif, yaitu tripsin. Karena teknik ini menyiratkan protokol tripsinisasi hangat, tripsin ditempatkan pada suhu sekitar 37 0 C selama sekitar empat jam.
Gambar 01: Tripsin
Isinya dicampur dan diaduk dengan menggunakan metode sentrifugasi untuk kemudahan protokol dan untuk mempercepat proses disagregasi. Setelah waktu yang direkomendasikan tercapai, sel dapat diturunkan dari supernatan. Sel-sel yang berasal dari supernatan kemudian diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu.
Apa itu Tripsinisasi Dingin?
Tripsinisasi dingin adalah jenis lain dari tripsinisasi yang terjadi dalam kondisi dingin. Dalam teknik ini, sel-sel yang dipotong dan dicuci ditempatkan dalam botol kecil di atas es dan kemudian direndam dengan tripsin. Jangka waktu perendaman lebih lama - sekitar 6 - 24 jam.
Setelah menyelesaikan prosedur perendaman, tripsin dikeluarkan dari lisat sel, dan potongan jaringan selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 0 C selama sekitar 20 - 30 menit. Disagregasi sel dilakukan dengan pipet berulang dari campuran jaringan. Ini akan memungkinkan sel untuk berdisosiasi dari membran dan mencapai supernatan. Setelah sel berada dalam supernatan, mereka diinkubasi dan ditumbuhkan pada suhu dan periode waktu yang diinginkan.
Metode tripsinisasi dingin memiliki beberapa keunggulan
- Hasil yang lebih tinggi dari sel yang layak karena kerusakan sel diminimalkan. Kerusakan sel diminimalkan dengan tidak menggunakan langkah sentrifugasi.
- Metode yang sangat nyaman.
- Tidak terlalu melelahkan.
Batasan utama dari metode tripsinisasi dingin adalah bahwa jumlah besar tidak dapat digunakan dalam satu contoh.
Apa Persamaan Antara Tripsinisasi Hangat dan Dingin?
- Baik proses Tripsinisasi Hangat dan Dingin menggunakan enzim tripsin untuk disagregasi sel.
- Baik proses Tripsinisasi Hangat dan Dingin digunakan dalam prosedur kultur sel untuk disagregasi sel.
- Dalam prosedur perawatan Tripsinisasi Hangat dan Dingin, sel-sel berasal dari supernatan.
Apa Perbedaan Antara Tripsinisasi Hangat dan Dingin?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
Tripsinisasi Hangat vs Dingin |
|
| Tripsinisasi hangat adalah metode pengobatan sel dengan tripsin dalam kondisi hangat pada suhu 36,5 - 37 0. | Tripsinisasi dingin adalah proses pengobatan tripsin yang berlangsung dalam kondisi yang lebih dingin lebih disukai dalam es yang mempertahankan suhu yang sangat rendah. |
| Protokol | |
| Potongan jaringan yang dipotong dipertahankan pada suhu 37 0 C terus menerus selama prosedur. | Potongan jaringan cincang awalnya dipertahankan pada suhu sedingin es dan kemudian dipertahankan pada suhu 37 0. |
| Suhu | |
| Tripsinisasi hangat terjadi pada 36,5 - 37 0 | Tripsinisasi dingin terjadi pada suhu sedingin es. |
| Waktu yang Dihabiskan | |
| Lebih sedikit waktu yang diperlukan untuk seluruh proses (sekitar 4 jam) tripsinisasi hangat. | Waktu yang dibutuhkan lebih lama (sekitar 6 - 24 jam) untuk tripsinisasi dingin. |
| Hasil Sel yang Layak | |
| Rendah dalam tripsinisasi hangat. | Tinggi dalam tripsinisasi dingin. |
| Penggunaan Sentrifugasi | |
| Sentrifugasi diperlukan untuk disagregasi sel dalam trypsinization hangat. | Sentrifugasi tidak diperlukan dalam tripsinisasi dingin. |
| Kuantitas Jaringan Awal untuk Tripsinisasi | |
| Jumlah jaringan yang lebih besar dapat digunakan dalam tripsinisasi hangat. | Jumlah jaringan yang lebih kecil dapat digunakan dalam tripsinisasi dingin. |
| Kerusakan Sel | |
| Tinggi karena sentrifugasi pada tripsinisasi hangat. | Lebih sedikit karena tripsinisasi dingin. |
Ringkasan - Tripsinisasi Hangat vs Dingin
Tripsinisasi adalah metode penggunaan tripsin enzim pengurai protein untuk disagregasi dan persiapan kultur sel primer selama proses kultur sel. Ada dua teknik utama tripsinisasi berdasarkan suhu yang digunakan selama prosedur. Mereka adalah tripsinisasi hangat dan dingin. Tripsinisasi hangat dilakukan pada 37 0 C sedangkan tripsinisasi dingin dilakukan dalam kondisi sedingin es. Meskipun tripsinisasi dingin membutuhkan waktu lebih lama untuk selesai, dikatakan memiliki hasil sel yang layak lebih tinggi. Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa kerusakan sel diminimalkan dalam tripsinisasi dingin karena tidak menggunakan langkah sentrifugasi yang kuat. Inilah perbedaan antara tripsinisasi hangat dan dingin.
