Perbedaan Kunci - Halaman SDS vs Western Blot
Western blotting adalah teknik yang mendeteksi protein tertentu dari sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah kunci: elektroforesis gel, blotting, dan hibridisasi. Elektroforesis gel Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide (SDS Page) adalah salah satu jenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk memisahkan protein menurut ukurannya (berat molekul). Western blot adalah lembaran khusus membran blotting yang digunakan untuk mentransfer pola yang sama dari protein di SDS Page. Perbedaan utama antara SDS Page dan western blot adalah SDS Page memungkinkan pemisahan protein dalam campuran sementara western blot memungkinkan deteksi dan kuantifikasi protein tertentu dari campuran. Keduanya berguna dalam studi analisis protein.
DAFTAR ISI
1. Gambaran Umum dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Halaman SDS
3. Apa itu Western Blot
4. Perbandingan Berdampingan - Halaman SDS vs Western Blot
5. Ringkasan
Apa itu Halaman SDS?
SDS Page adalah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pemisahan protein. Ini biasanya digunakan dalam biokimia, genetika, forensik dan biologi molekuler. Setelah protein diekstraksi dari sampel, protein tersebut dijalankan pada gel yang terdiri dari SDS dan poliakrilamida. SDS adalah deterjen anionik yang digunakan untuk melinierisasi protein (mendenaturasi protein) dan untuk memberikan muatan negatif ke protein yang dilinierisasi sebanding dengan massa molekulnya. Poliakrilamida menjadi penyangga padat untuk gel. Protein yang didenaturasi yang bermuatan negatif bermigrasi ke arah ujung positif dari peralatan melalui gel. Menurut ukuran protein, kecepatan migrasi berbeda di antara protein dan terjadi pemisahan. Oleh karena itu, halaman SDS berguna untuk pemisahan protein individu berdasarkan ukurannya.
Persiapan gel poliakrilamida untuk fraksinasi protein merupakan langkah penting dalam SDS Page. Konsentrasi poliakrilamida yang benar dan jenis zat pengikat silang yang digunakan sangat mempengaruhi sifat fisik gel, yang membuat pemisahan sebenarnya dari protein yang berbeda. Ukuran pori gel harus dikelola dengan baik untuk pemisahan yang efektif. Namun, SDS Page dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.
Teknik SDS Page memiliki keterbatasan utama dalam analisis protein. Karena SDS mendenaturasi protein sebelum pemisahan, SDS tidak memungkinkan deteksi aktivitas enzimatis, interaksi pengikatan protein, kofaktor protein, dll.
Gambar 01: Halaman SDS
Apa itu Western Blot?
Teknik Western blotting memungkinkan pendeteksian protein tertentu dari campuran protein dan pengukuran kuantitas dan berat molekul protein. Western blot adalah membran yang digunakan selama prosedur blotting untuk mendapatkan bayangan cermin dari pola protein dalam gel poliakrilamida SDS. Membran yang digunakan untuk western blotting sebagian besar terdiri dari nitroselulosa atau polivinilidena difluorida (PVDF). Membran dengan protein yang ditransfer dapat digunakan untuk mengidentifikasi protein yang diinginkan. Ini membutuhkan antibodi berkualitas tinggi untuk mendeteksi protein yang diinginkan dengan hibridisasi. Antibodi tersebut mengikat antigen spesifiknya dan mengungkapkan adanya antigen yang diinginkan, yaitu protein.
Mentransfer protein dari gel poliakrilamida SDS ke blot barat dilakukan dengan elektroblot. Ini adalah metode yang efektif dan cepat yang menyebabkan protein mengeluarkan elektroforesis dari gel dan melewati membran nitroselulosa (western blot).
Gambar 02: Western Blot
Apa perbedaan antara SDS Page dan Western Blot?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
Halaman SDS vs Western Blot |
|
| SDS Page adalah teknik elektroforesis gel. | Western blot adalah teknik yang dilakukan pada membran untuk mendeteksi protein tertentu dari suatu campuran. |
| Menggunakan | |
| Halaman SDS memungkinkan pemisahan protein sesuai dengan ukurannya. | Western blot memungkinkan transfer protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah polanya & memungkinkan hibridisasi dengan antibodi spesifik. |
| Kekurangan | |
| Denaturasi protein, biaya tinggi, dan keberadaan bahan kimia neurotoksin adalah kelemahan dari teknik ini. | Teknik ini memakan waktu dan membutuhkan kondisi pribadi yang berpengalaman dan terkontrol secara spesifik. |
Ringkasan - Halaman SDS vs Western Blot
Halaman SDS dan western blot adalah dua metode yang terlibat dalam analisis protein. SDS Page memungkinkan pemisahan protein dengan mudah pada gel sesuai dengan berat molekulnya. Western blot membantu memastikan keberadaan dan kuantitas protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi spesifik. Inilah perbedaan antara SDS Page dan western blot.
