Perbedaan Utama - Kloning vs Subklon
Kloning dan Subkloning adalah prosedur biologi molekuler yang membuat sel atau organisme yang identik secara genetik yang membawa DNA atau gen yang diinginkan. Kloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen atau DNA yang tertarik ke dalam vektor, replikasi di dalam bakteri inang, dan produksi sel atau organisme yang merupakan salinan persis dari susunan genetik. Subkloning adalah teknik yang melibatkan penyisipan gen yang diinginkan, yang telah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasi gen tersebut dalam bakteri inang, dan produksi salinan sel atau organisme yang identik secara genetik. Perbedaan utama antara kloning dan subkloning adalah bahwa, dalam kloning, gen yang diinginkan, setelah diikat menjadi vektor, melanjutkan proses kloning sementara, dalam subklon,gen bunga yang telah dikloning dipisahkan dari vektor induk dan disisipkan lagi ke dalam vektor penerima dan melanjutkan proses.
DAFTAR ISI
1. Gambaran Umum dan Perbedaan Utama
2. Apa itu Kloning
3. Apa itu Subkloning
4. Perbandingan Berdampingan - Kloning vs Subklon
5. Ringkasan
Apa itu Kloning?
Kloning adalah prosedur yang menghasilkan organisme atau sel yang identik secara genetik. Di alam, kloning terjadi dalam alat reproduksi aseksual. Jika tidak ada rekombinasi atau perubahan genetik, sel anak menerima susunan genetik yang sama dari induknya. Organisme prokariotik dan eukariotik membuat klon dengan pembelahan biner, tunas, mitosis, dll. Dalam biologi molekuler, gen kloning atau fragmen spesifik DNA adalah metode populer untuk mempelajari struktur dan fungsi bagian DNA tertentu.
Tujuan utama kloning molekuler adalah membuat jutaan salinan sel atau organisme yang identik secara genetik yang membawa fragmen DNA yang diinginkan (terutama gen). Ini menciptakan organisme dengan salinan genetik yang tepat dari yang lain. Terutama, gen tertentu dikloning dalam studi molekuler untuk mendapatkan informasi struktural dan fungsional dan untuk sekuensing DNA. Selain itu, untuk produksi protein atau produk tertentu dalam skala besar, kloning digunakan secara luas.
Prosedur Kloning
Langkah-langkah dasar prosedur kloning adalah sebagai berikut.
- Identifikasi dan isolasi gen yang diinginkan. (Amplifikasi gen yang diinginkan dengan PCR).
- Pembatasan pencernaan Gen yang diinginkan (Pembatasan endonuklease memotong gen tersebut).
- Pembatasan pencernaan vektor DNA. (DNA vektor juga dipotong menggunakan restriksi endonuklease yang sama).
- Penyisipan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
- Transformasi vektor rekombinan menjadi bakteri inang.
- Isolasi dan identifikasi bakteri yang ditransformasi (vektor plasmid harus mengandung gen yang dapat dipilih, paling umum gen resistensi antibiotik untuk menyaring bakteri yang diubah).
- Ekspresi gen rekombinan dalam inang.
Gambar_01: Prosedur Kloning
Apa itu Subcloning?
Subcloning adalah prosedur memindahkan gen yang diinginkan dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsionalitas gen yang diinginkan. Dalam metode ini, dua vektor dilibatkan; yaitu, vektor induk dan vektor tujuan. Sisipan kloning dipindahkan lagi ke vektor kedua dalam subklon. Tujuan transfer gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau untuk memisahkan gen lagi di dalam fragmen DNA yang sudah diklon dan mengekspresikannya sendiri. Enzim restriksi digunakan dalam prosedur ini di awal.
Prosedur Subcloning
Langkah-langkah dasar subcloning adalah sebagai berikut.
- Dengan bantuan restriksi endonuklease, pemisahan DNA yang diinginkan pada plasmid donor (vektor induk).
- Amplifikasi DNA bunga menggunakan PCR.
- Pemurnian produk PCR (DNA yang diinginkan) dengan elektroforesis gel.
- Pembukaan plasmid resipien dengan restriksi endonuklease yang sama yang digunakan untuk memisahkan DNA dari plasmid induk.
- Ligasi DNA bunga (gen) ke dalam plasmid penerima untuk membuat plasmid subklon.
- Transformasi vektor subklon menjadi bakteri inang yang kompeten.
- Skrining sel yang diubah.
- Pemurnian DNA plasmid dan digunakan untuk sekuensing DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diinginkan.
Subklon dilakukan pada saat mengisolasi satu gen dari kelompok gen kloning atau ketika gen yang diinginkan perlu dipindahkan ke dalam plasmid yang berguna untuk melihat fungsi yang tepat dari gen yang diinginkan.
Gambar_02: Prosedur Subcloning
Apa perbedaan antara Kloning dan Subkloning?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
Kloning vs Subklon |
|
| Kloning adalah prosedur yang menghasilkan organisme atau sel yang identik secara genetik. | Subcloning adalah prosedur memindahkan gen yang diinginkan dari satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen untuk mendapatkan fungsionalitas gen yang diinginkan. |
| Proses | |
| Pisahkan DNA yang diinginkan dari organisme dan dimasukkan ke dalam vektor sekali dan dikloning | DNA yang sudah diklon dipisahkan dari vektor pertama dan dimasukkan ke dalam vektor kedua dan dikloning. |
| Sisipkan Gerakan melalui Vektor | |
| Tidak memindahkan sisipan (DNA yang diinginkan) dari satu vektor ke vektor lain. | Pindahkan sisipan dari vektor induk ke vektor tujuan. |
Ringkasan - Kloning vs Subklon
Kloning menciptakan sel atau organisme yang identik secara genetik dengan gen yang disisipkan atau DNA yang diinginkan. Ini berlangsung melalui pemisahan dan penyisipan DNA yang diinginkan ke dalam vektor dan ekspresi dalam bakteri inang. Subkloning memiliki langkah yang sama dengan kloning. Namun, dalam subklon, fragmen DNA hasil kloning (gen yang diinginkan) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteri inang. Itulah perbedaan utama antara kloning dan subklon.
