Perbedaan Utama - Kertas vs Lapisan Tipis vs Kromatografi Kolom
Kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kolom adalah tiga jenis teknik kromatografi. Perbedaan utama antara kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis, dan kromatografi kolom didasarkan pada jenis fase diam yang digunakan dalam teknik kromatografi. Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fase diamnya, kromatografi Lapis Tipis menggunakan alumina atau silika gel sebagai fase diamnya, sedangkan kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan bahan matriks yang sesuai sebagai fase diamnya.
Dalam proses pemisahan dan identifikasi biomolekul seperti protein dan karbohidrat, kromatografi merupakan teknik biofisik yang penting digunakan. Kromatografi memisahkan senyawa berdasarkan kelarutan, ukuran dan muatannya. Berdasarkan mekanisme pemisahannya, kromatografi menggunakan mekanisme pertukaran ion, absorpsi, partisi dan pengecualian ukuran dan terdapat tiga teknik kromatografi; yaitu kromatografi kertas, lapis tipis, dan kolom. Kromatografi kertas didasarkan pada adsorpsi padat-cair dan kelarutan senyawa, serta menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam. Kromatografi lapis tipis didasarkan pada adsorpsi molekul padat-cair. Ini memiliki fase diam yang biasanya terbuat dari alumina atau silika gel dan fase gerak yang merupakan pelarut. Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas, atau muatannya.
ISI
1. Tinjauan Kromatografi dan Perbedaan Kunci
2. Apa itu Kromatografi Kertas
3. Apa itu Kromatografi Lapis Tipis
4. Apa itu Kromatografi Kolom
5. Persamaan Antara Kertas, Lapis Tipis, dan Kromatografi Kolom
6. Perbandingan Berdampingan - Kertas vs Lapis Tipis vs. Kromatografi Kolom dalam Bentuk Tabel
7. Ringkasan
Apa itu Kromatografi Kertas?
Kromatografi kertas adalah jenis kromatografi yang paling sederhana yang digunakan, dan tidak digunakan untuk penelitian ekstensif. Ini terutama digunakan di laboratorium siswa untuk mengidentifikasi biomolekul seperti asam amino dan karbohidrat yang ada dalam campuran. Kromatografi kertas menggunakan fasa diam yang dibuat menggunakan kertas selulosa atau kertas saring Whatman dan fasa gerak yang biasanya dibuat menggunakan pelarut organik seperti n-butanol, dll. Fasa diam dijenuhkan dengan air sehingga fasa diam menjadi cair. Jadi, bila senyawa-senyawa tersebut berbintik dan dibiarkan berjalan dengan adanya fasa gerak, bergantung pada kelarutan senyawa, senyawa tersebut dipisahkan. Dengan demikian, seiring dengan perkembangan kromatogram, dapat dilakukan pewarnaan untuk menentukan lama kerja masing-masing senyawa. Dengan demikian, faktor retensi dapat dihitung.
Gambar 01: Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas dapat diklasifikasikan lebih lanjut sebagai kromatografi kertas naik dan kromatografi kertas turun tergantung pada arah pelarut yang bekerja.
Apa itu Kromatografi Lapis Tipis?
Kromatografi lapis tipis atau KLT adalah teknik yang umum digunakan untuk mengidentifikasi asam amino berbeda yang ada dalam campuran atau untuk identifikasi protein. Teknik pemisahan didasarkan pada adsorpsi padat-cair. Selama kromatografi lapis tipis, pelat yang terbuat dari alumina atau silika gel digunakan sebagai fase diam. Campuran pelarut bervariasi sesuai kebutuhan dan dapat menggunakan kombinasi senyawa organik yang berbeda seperti n-butanol, asam asetat, dan air untuk membuat pelarut. Senyawa yang akan dipisahkan ditotolkan di piring dan direndam dalam campuran pelarut. Begitu pelarut bergerak berdasarkan aksi kapiler yang diberikan oleh pelat, senyawa yang terlihat di pelat juga bergerak tergantung pada kelarutannya dalam pelarut.
Gambar 02: Kromatografi Lapis Tipis
Deteksi bintik-bintik setelah kromatogram dilakukan dengan prosedur pewarnaan yang berbeda. Beberapa menggunakan pewarnaan ninhydrin yang merupakan metode pewarnaan yang cukup beracun. Kromatogram lapis tipis modern menggunakan teknik fluoresensi untuk melihat kromatogram setelah dijalankan. Bergantung pada jarak yang telah ditempuh, waktu retensi setiap senyawa dapat dihitung. Ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi jenis senyawa yang dipisahkan berdasarkan campuran yang digunakan. TLC terutama digunakan untuk mengidentifikasi asam amino dalam campuran protein dan juga untuk memisahkan berbagai jenis monosakarida yang ada dalam campuran.
Apa itu Kromatografi Kolom?
Kromatografi kolom adalah istilah luas yang digunakan untuk menggambarkan berbagai jenis teknik kromatografi yang menggunakan metode pemisahan berbasis kolom. Dalam kromatografi kolom, kolom fisik digunakan dengan bahan pengemas untuk memisahkan senyawa. Pemisahan mungkin didasarkan pada sifat fisik yang berbeda yang ditunjukkan oleh senyawa. Properti ini dapat berupa muatan, ukuran, konformasi 3D dan kapasitas pengikatan, dll. Dengan demikian, kolom yang dikemas dengan bahan matriks bertindak sebagai fase diam dan penyangga pencucian yang diterapkan ke kolom berfungsi sebagai fase gerak.
Jika molekul dipisahkan berdasarkan ukurannya, bahan pengemas dikemas sedemikian rupa sehingga meninggalkan pori-pori untuk dilalui senyawa. Jadi, molekul yang lebih besar yang tidak dapat mengalir melalui pori-pori dielusi terlebih dahulu, sedangkan molekul yang lebih kecil membutuhkan waktu lebih lama untuk terelusi.
Gambar 03: Kromatografi Kolom
Jika molekul dipisahkan berdasarkan muatannya, fase diam akan mengandung penukar anion atau kation yang akan menarik senyawa berdasarkan muatannya. Jadi selama tahap pencucian, senyawa tak terikat akan terelusi. Setelah menambahkan buffer elusi, senyawa bermuatan terikat akan dielusi. Deteksi eluen ini sebagian besar didasarkan pada teknik spektrofotometri.
Apa Persamaan Antara Lapisan Tipis Kertas dan Kromatografi Kolom?
- Semua Kertas Tipis Lapis Tipis dan Kromatografi Kolom tiga teknik digunakan untuk pemisahan biomolekul seperti asam amino, protein dan karbohidrat.
- Teknik Kromatografi Lapis Tipis Kertas dan Kolom memiliki fasa gerak dan fasa diam.
- Teknik Kromatografi Lapis Tipis Kertas dan Kolom menggunakan mekanisme biofisik untuk pemisahannya.
Apa Perbedaan Antara Lapisan Tipis Kertas dan Kromatografi Kolom?
Artikel Diff Tengah sebelum Tabel
Kertas vs Lapisan Tipis vs Kromatografi Kolom |
|
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas adalah teknik kromatografi yang digunakan untuk memisahkan senyawa berdasarkan adsorpsi cair-cair dan kelarutan suatu senyawa. Ini menggunakan kertas selulosa sebagai fase diamnya. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Kromatografi lapis tipis adalah teknik kromatografi lain yang didasarkan pada adsorpsi molekul padat-cair. Ini memiliki fasa diam yang terbuat dari alumina atau silika gel dan pelarut sebagai fasa gerak, yang merupakan pelarut. |
| Kromatografi Kolom | Kromatografi kolom menggunakan kolom yang dikemas dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutama berdasarkan ukuran, afinitas, atau muatannya. |
| Fase Stasioner | |
| Kromatografi Kertas | Kertas yang terbuat dari nitroselulosa dari Whatman digunakan sebagai fase diam dalam kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Alumina atau Silica gel digunakan sebagai fase diam pada kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Kolom yang dikemas dengan bahan pengemas yang sesuai digunakan sebagai fase diam dalam kromatografi kolom. |
| Fase Seluler | |
| Kromatografi Kertas | Pelarut yang sedang berjalan adalah fase gerak dari kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Pelarut berjalan adalah fase gerak dari kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Buffer pencucian adalah fase gerak dari kromatografi kolom. |
| Mekanisme yang Digunakan untuk Pemisahan | |
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas didasarkan pada penyerapan cairan padat. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Kromatografi lapis tipis didasarkan pada absorpsi padat-cair. |
| Kromatografi Kolom | Kromatografi kolom didasarkan pada pengecualian ukuran, muatan dan bentuk. |
| Elution Buffer | |
| Kromatografi Kertas | Tidak diperlukan oleh kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Tidak diperlukan untuk kromatografi lapis tipis. |
| Kromatografi Kolom | Diperlukan dalam kromatografi kolom. |
| Deteksi | |
| Kromatografi Kertas | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
| Kromatografi Lapis Tipis | Pewarnaan dan dengan menentukan faktor Retensi. |
| Kromatografi Kolom | Penentuan spektrofotometri. |
Ringkasan - Lapisan Tipis Kertas vs Kromatografi Kolom
Kromatografi kertas, KLT dan kromatografi kolom adalah teknik pemisahan yang digunakan untuk memisahkan biomolekul seperti protein, asam amino dan karbohidrat (terutama monosakarida). Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fase diam, dan mekanisme pemisahannya didasarkan pada adsorpsi padat-cair. TLC juga menggunakan mekanisme adsorpsi padat-cair. Molekul dipisahkan pada fase diam, tergantung pada kelarutannya dalam fase gerak. Kromatografi kolom menggunakan sifat fisik seperti ukuran, bentuk, muatan dan berat molekul senyawa untuk memisahkannya. Kolom yang dikemas dengan bahan matriks bertindak sebagai fase diam, sedangkan buffer pencucian bertindak sebagai fase pelarut. Inilah perbedaan antara lapisan tipis kertas dan kromatografi kolom.
